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loading buffer是什么作用
時(shí)間:2024-11-30 01:13:28
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核酸電泳中l(wèi)oading buffer的作用:
(1)指示作用:內(nèi)含劑溴酚藍(lán)和二甲苯氰,顯示電泳的進(jìn)程,以便適時(shí)終止電泳;
(2)沉降樣品:成分甘油可以加大樣品密度,使沉到點(diǎn)樣孔中防止樣品飄出;
(3)變性聚合酶:SDS主要是促使聚合酶變性,避免其結(jié)合在DNA雙鏈上影響遷移速率。
loading buffer在蛋白電泳中的作用:
(1)溴酚藍(lán)指示電泳位置、使樣品沉入點(diǎn)樣孔;
(2)內(nèi)含還原劑破壞二硫鍵,而不會(huì)破壞蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),不影響WB檢測(cè),因?yàn)閃B主要只是測(cè)蛋白表達(dá)量,而不需要蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu);
(3)使SDS與蛋白按比例結(jié)合,使蛋白表面均勻帶上負(fù)電荷
(4)煮沸使蛋白酶失活,中止酶促反應(yīng),防止提取的蛋白質(zhì)降解;
(5)煮沸使DNA充分打斷變性;。
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